Bioteknologi telah dikembangkan dan digunakan untuk meningkatkan efisiensi reproduksi ternak. Produksi embrio in vitro mengacu pada penggunaan teknik laboratorium untuk menghasilkan embrio. Metode IVEP melibatkan tiga langkah dasar, seperti pematangan in vitro (IVM) oosit primer yang dikumpulkan dari folikel, pembuahan oosit sekunder yang matang, dan kultur calon embrio ke tahap blastokista. IVEP efisiensinya terbatas; dapat menghasilkan sekitar 30-50% blastokista yang layak. Pematangan in vitro (IVM) merupakan langkah awal dari metode IVEP. Dalam proses maturasi in vitro diperlukan sistem kultur yang stabil dan kualitas oosit sebagai sumber oosit yang baik. Ada beberapa hal yang dapat meningkatkan keberhasilan pematangan oosit, tergantung pada kondisi kultur yang digunakan, seperti stimulasi hormonal pada medium, suplementasi medium, karakteristik spesies dan waktu pemaparan pematangan. Waktu kultur yang optimal berguna untuk pengembangan kompetensi oosit IVM. Jika waktu kultur terlalu singkat, maka pematangan sitoplasma dan nukleus tidak sinkron dan akan mempengaruhi potensi perkembangan embrio selanjutnya. Waktu penyimpanan yang lama dapat menurunkan kualitas oosit. Setelah 24 jam IVM, oosit ovine menunjukkan tanda-tanda degenerasi, seperti penyusutan dan granulasi ooplasma, serta disorganisasi distribusi mitokondria. Distribusi mitokondria merupakan proses yang dimediasi oleh jaringan mikrotubulus, dan membutuhkan ATP tinggi yang disuplai melalui metabolisme mitokondria. Mitokondria memodulasi amplitudo dan kinetika perubahan Ca2+ sitoplasma lokal dan massal; selain itu, mereka bergantung pada sinyal Ca2+ untuk fungsinya sendiri, terutama untuk kapasitasnya menghasilkan ATP. mCa2+ telah ditemukan sebagai komponen penting yang mengontrol laju produksi ATP, dan mengontrol terjadinya MPT, yang berperan dalam kontrol apoptosis mitokondria. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk mengetahui waktu optimum maturasi oosit secara in vitro dan korelasinya dengan apoptosis.
Setiap perbaikan dalam teknik reproduksi terbantu pada tingkat eksperimental penting dalam produksi in vitro embrio hewan besar dan manusia. Sistem produksi embrio in vitro mencakup tiga tahap utama, yaitu pematangan oosit primer secara in vitro, fertilisasi in vitro pada oosit yang telah matang, dan kultur in vitro dari embrio presumtif. Keberhasilan fertilisasi in vitro dan kultur embrio bergantung pada keberhasilan pematangan in vitro. Namun, kondisi kultur standar biasanya meningkatkan spesies oksigen reaktif (ROS), yang dianggap sebagai salah satu penyebab utama berkurangnya perkembangan embrio. Telah diketahui bahwa ROS yang lebih tinggi dari tingkat fisiologis memicu apoptosis sel granulosa dan dengan demikian mengurangi transfer nutrisi dan faktor kelangsungan hidup ke oosit, yang mengarah pada apoptosis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui waktu optimal pematangan oosit dan hubungannya dengan fragmentasi DNA. Ovarium dikumpulkan dari rumah jagal dan folikel disedot. Kompleks kumulus oosit (COC) dibagi menjadi beberapa kelompok dan dipindahkan ke media maturasi, di mana mereka dipertahankan selama 18 jam (P1), 22 jam (P2) dan 24 jam (P3) untuk dievaluasi tingkat maturasinya. Oosit yang matang ditandai dengan oosit yang telah mencapai stadium MII. Oosit yang matang diimbangi dengan terminal deoxynucleotidyl transferase nick-end labeling (TUNEL). Hasil penelitian menunjukkan tingkat kematangan oosit kambing Kacang pada jam ke-18 mencapai 46%, jam ke-22 mencapai 77%, dan jam ke-24 mencapai 63%. Namun hasil penelitian menunjukkan bahwa ekspresi fragmentasi DNA pada P2 (2,4 卤 0,89) berbeda nyata dengan P1 (5,4 卤 2,61) dan P3 (9,0 卤 2,12). Kesimpulannya waktu optimal maturasi oosit kambing kacang secara in vitro adalah 22 jam.
Penulis: Widjiati Widjiati
Publikasi di jurnal: Veterinarska Stanica
Link Artikel:
